|
|
Electrochemical biosensors with spatially separated enzymatic and detection parts for selective analysis in flow-through arrangement
Tvorynska, Sofiia ; Barek, Jiří (vedoucí práce) ; Labuda, Ján (oponent) ; Korecká, Lucie (oponent)
Předpokládaná disertační práce pojednává o čtyřech nově vyvinutých, opakovaně použitelných, stabilních a zároveň jednoduchých a cenově výhodných elektrochemických (bi)enzymatických biosenzorech pro selektivní a spolehlivé stanovení cholinu, acetylcholinu, močové kyseliny a L-mléčné kyseliny. Všechny biosenzory jsou založeny na koncepci prostorového oddělení biorozpoznávací části od detekční a amperometrického monitorování enzymaticky spotřebovaného kyslíku prostřednictvím jeho čtyřelektronové redukce při vysoce záporném detekčním potenciálu. Konstrukce biosenzorů zahrnuje snadno vyměnitelný enzymatický/é mini-reaktor(y) připojený/é před průtokovou celou, která obsahuje příslušný převodník na bázi pevného stříbrného amalgámu. Enzymatické mini-reaktory založené na cholin oxidase, urikase nebo laktát oxidase byly použity pro biosenzory na cholin, močovou kyselinu nebo L-mléčnou kyselinu. Bienzymatický biosenzor na acetylcholin zahrnuje sériově propojené mini-reaktory na bázi acetylcholinesterasy a cholin oxidasy. První část této práce se zaměřuje na konstrukci dvou různých elektrod na bázi stříbrného amalgámu. Konkrétně tato část pojednává o výrobě stříbrné pevné amalgámové elektrody pokryté rtuťovým filmem pro wall-jet průtokovou celu a navíc, zdůrazňuje rozdíly mezi jejím využitím jako...
|
|
|
Genová exprese vysokoafinitního přenašeče cholinu u myšího modelu Alzheimerovy nemoci
Kurfürst, Helena ; Doležal, Vladimír (vedoucí práce) ; Krištofíková, Zdena (oponent)
: Cholin slouží ve všech savčích buňkách jako prekurzor pro syntézu hlavního membránového fosfolipidu fosfatidylcholinu a jako donor acetylových skupin. V cholinergních neuronech je navíc nezbytným prekurzorem neuromediátoru acetylcholinu. Schopnost buněk syntetizovat vlastní cholin nestačí pro jejich potřeby a tak musí být významná část cholinu vychytávána z extracelulárního prostředí. Omezení dostupnosti cholinu v mozku vede specificky k oslabování funkce cholinergních neuronů a obecně k poruchám obnovování membrán u všech buněk. Poruchy funkce cholinergní signalizace a související nervové činnosti jsou charakteristické pro Alzheimerovu nemoc. Cílem této práce bylo zjistit zda u myšího modelu Alzheimerovy nemoci APPswe /PS1dE9 dochází ke změnám genové exprese vysokoafinitních cholinergních přenašečů. Byla stanovena exprese specifického cholinergního vysokoafinitního přenašeče cholinu CHT1, který dopravuje cholin pro syntézu acetylcholinu a předpokládaného vysokoafinitního přenašeče cholinu CTL1, který se vyskytuje obecně ve všech buňkách a souvisí s dodávkou cholinu pro syntézu fosfolipidů. V mozkové kůře 5-6 měsíců starých myší nebyly v expresi obou genů při srovnání s kontrolami ze stejného vrhu zjištěny žádné změny ani na úrovni mRNA (kvantitativní PCR) ani úrovni proteinu (Western blot...
|
|
|
Aplikace MR spektroskopie v neurochirurgii
Malucelli, Alberto ; Hájek, Milan (vedoucí práce) ; Ryznarová, Zuzana (oponent) ; Vaverka, Miroslav (oponent)
Protonová MR spektroskopie je neinvazivní metoda měření in vivo koncentrací několika metabolitů. Cílem této práce bylo otestovat její použitelnost a spolehlivost v neurochirurgické praxi. V první části studie bylo ve skupině pacientů po operaci a onkologické léčbě pro vysokostupňový gliom testováno více metod MR spektroskopické analýzy, aby se zjistilo, která z nich nejlépe rozlišuje recidivu tumoru od radionekrózy při nově kontrastně se sytící lézi. Nejlépe fungovala metoda založená na srovnání cholinu, kreatinu a laktátu mezi lézí a kontralaterální stranou (senzitivita 93,3% a specificita 78,6%). Statisticky významné snížení kreatinu bylo zjištěno u všech pacientů ve srovnání s kontrolami. Bylo zjištěno, že inhibiční účinek probíhající radio- a chemoterapie na mozkový a nádorový metabolismus činí diferenciální diagnostiku obtížnější. Proto by měla být diagnóza radionekrózy během probíhající onkologické léčby potvrzena pozdějším vyšetřením po jejím ukončení. Dále v druhé části studie byla MR spektroskopická data ve skupině pacientů s jednostrannou okluzí vnitřní krkavice porovnána s MR hipokampální volumetrií a transkraniálním dopplerovským vyšetřením s nálezem statisticky signifikantního nižšího poměru N-acetylaspartát/cholin v bílé hmotě obou hemisfér a oboustranné atrofie hipokampu. MR...
|
|
|
Construction and Application of Flow Amperometric Biosensor Based on Enzymatic Reactor for Determination of Choline
Tvorynska, Sofiia ; Barek, J. ; Josypčuk, Bohdan
In this contribution, a novel fast, simple and stable biosensor with the enzymatic reactor based on choline oxidase (ChOx) was developed and applied for the determination of choline using flow injection analysis with amperometric detection. The preparation of the reactor is based on the covalent immobilization of ChOx with glutaraldehyde to mesoporous silica powder (SBA-15) previously covered by NH2-groups. The experimental parameters affecting the sensitivity and stability of the biosensor were optimized. The proposed biosensor with the newly developed ChOx-based reactor possesses good repeatability, reproducibility, long-term stability, and reusability. It was successfully applied for the determination of choline in commercial pharmaceuticals.
|
|
|
Pleiotropní účinky transkripčního faktoru Opi1 u Saccharomyces cerevisiae
Pavlíčková, Martina ; Schierová, Michaela (vedoucí práce) ; Mašek, Tomáš (oponent)
Biosyntéza fosfolipidů u Saccharomyces cerevisiae je regulována aktivačním komplexem Ino2p-Ino4p a represorem Opi1p. Nejvíce regulovaný gen je INO1, který kóduje inositol-3- fosfátsynthasu. Tento enzym katalyzuje první krok metabolické dráhy, při které vzniká inositol. Aktivační komplex Ino2p-Ino4p se váže přímo na DNA v promotorové oblasti genů a interaguje s dalšími proteiny nezbytnými pro aktivaci (Snf1p, SAGA, SWI/SNF, INO80). Opi1p způsobuje represi transkripce přímou vazbou na Ino2p a interakcí s dalšími proteiny (Sin3p, Cyc8p). Aktivita proteinu Opi1p je řízena jeho lokalizací v buňce a fosforylací. Regulace fosfolipidů je závislá na růstové fázi a dostupnosti prekursorů. Protein Opi1p kromě biosyntézy fosfolipidů ovlivňuje i další děje v buňce: metabolismus mitochondrií, stres v endoplazmatickém retikulu, velikost buněk, morfologii kolonií a invazivní růst.
|
|
|
Genová exprese vysokoafinitního přenašeče cholinu u myšího modelu Alzheimerovy nemoci
Kurfürst, Helena ; Krištofíková, Zdena (oponent) ; Doležal, Vladimír (vedoucí práce)
: Cholin slouží ve všech savčích buňkách jako prekurzor pro syntézu hlavního membránového fosfolipidu fosfatidylcholinu a jako donor acetylových skupin. V cholinergních neuronech je navíc nezbytným prekurzorem neuromediátoru acetylcholinu. Schopnost buněk syntetizovat vlastní cholin nestačí pro jejich potřeby a tak musí být významná část cholinu vychytávána z extracelulárního prostředí. Omezení dostupnosti cholinu v mozku vede specificky k oslabování funkce cholinergních neuronů a obecně k poruchám obnovování membrán u všech buněk. Poruchy funkce cholinergní signalizace a související nervové činnosti jsou charakteristické pro Alzheimerovu nemoc. Cílem této práce bylo zjistit zda u myšího modelu Alzheimerovy nemoci APPswe /PS1dE9 dochází ke změnám genové exprese vysokoafinitních cholinergních přenašečů. Byla stanovena exprese specifického cholinergního vysokoafinitního přenašeče cholinu CHT1, který dopravuje cholin pro syntézu acetylcholinu a předpokládaného vysokoafinitního přenašeče cholinu CTL1, který se vyskytuje obecně ve všech buňkách a souvisí s dodávkou cholinu pro syntézu fosfolipidů. V mozkové kůře 5-6 měsíců starých myší nebyly v expresi obou genů při srovnání s kontrolami ze stejného vrhu zjištěny žádné změny ani na úrovni mRNA (kvantitativní PCR) ani úrovni proteinu (Western blot...
|
host ::
RSS.